携带报告基因EGFP的CXCR4 RNA干扰质粒的构建及生物活性的鉴定

作者：杜岳峰; 邢毅飞; 肖亚军; 曾甫清; 王美玉; 陆鹏; 刘先艮

来源：临床泌尿外科杂志, 2006, (04): 305-308.

DOI：10.3969/j.issn.1001-1420.2006.04.027

• RNA干扰
• 趋化因子受体4
• 绿色荧光蛋白
• 前列腺肿瘤

目的构建携带报告基因EGFP的CXCR4RNA干扰质粒,证实其高效抑制靶基因表达的生物活性。方法设计有发夹状结构的两条DNA序列,用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGensil-1质粒,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。重组质粒转染PC-3m细胞株,检测绿色荧光蛋白表达及对细胞CXCR4表达的抑制情况。结果成功构建了CXCR4靶向的RNA干扰质粒pGensil-1/siCXCR4,在靶细胞可同时表达siRNA及绿色荧光蛋白。结论pGensil-1/siCXCR4质粒的成功构建对利用基因干扰技术治疗前列腺癌转移方面的研究奠定了一定的实验基础。

• 单位
  西安交通大学; 华中科技大学; 协和医院