G蛋白偶联受体30激动剂调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体的研究

作者：付强; 秦涛; 胡明星; 王玉柱; 刘传江; 张旭; 翟振胜; 夏鹏; 张宏伟^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, (03): 446-448.

• G蛋白偶联受体30
• 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3
• 炎性小体
• 白细胞介素-1β

目的 观察G蛋白偶联受体30(GPR30)激动剂G-1抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的活化白细胞介素-1β(IL-1β)成熟的作用。方法 提取C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,使用10、30、50 μmol/L G-1预处理巨噬细胞,经50 ng/ml脂多糖(LPS)诱导后,收集巨噬细胞,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)和IL-1β mRNA的表达量,Western blot法检测NLRP3、ASC、pro-Caspase-1蛋白的表达。使用1、5、15、30、50 μmol/L浓度梯度G-1预处理巨噬细胞,50 ng/ml LPS和5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)诱导细胞后,收集培养基上清,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果 G-1预处理巨噬细胞,LPS诱导后NLRP3、ASC和IL-1β mRNA表达量与LPS组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NLRP3、ASC和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶前体(pro-Caspase-1)蛋白表达量与LPS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA结果显示,随着G-1浓度升高,与LPS＋ATP组(2 714.73±107.05)比较,IL-1β含量(3 062.42±12.10、1 709.29±25.31、653.27±35.66、144.23±4.18、98.40±2.02)呈梯度性降低,G-1浓度≥5 μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。TNF-α含量(361.93±10.66、394.62±20.46、444.17±14.80、444.73±19.21、366.41±27.04)与LPS＋ATP组(412.38±1.59)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 GPR30激动剂G-1可特异性抑制NLRP3炎性小体的活化和IL-1β的成熟。

• 单位
  郑州大学; 河南省人民医院