黄花蒿悬浮培养细胞系的建立及遗传转化

作者：龙炎杏; 张学文; 罗莎; 肖楠; 赵燕^*

来源：湖南农业大学学报(自然科学版), 2018, 44(06): 607-612.

DOI：10.13331/j.cnki.jhau.2018.06.006

• 黄花蒿
• 6–苄基氨基腺嘌呤
• 萘乙酸
• 二氯苯氧乙酸
• 悬浮细胞
• 农杆菌介导
• 遗传转化

为建立稳定的黄花蒿悬浮细胞系,以黄花蒿428–A植株的子叶、茎、腋芽和叶片为外植体,以MS为基础培养基,采用3因素(6–BA、NAA、2,4–D)4水平的L16(43)正交试验,优化黄花蒿愈伤组织诱导培养基,分析不同质量浓度(0、5、10、15、20、25、30 mg/L)潮霉素对黄花蒿悬浮细胞生长的影响,比较羧苄青霉素(0、100、150、200、250、300 mg/L)对农杆菌的抑制效果,并运用农杆菌介导法对黄花蒿悬浮细胞进行GUS报告基因及色氨酸单加氧酶iaaM基因的遗传转化。结果表明:黄花蒿叶片愈伤诱导率较高,叶片愈伤组织较优培养基为MS+6–BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,出愈率可达99.33%;潮霉素最适筛选质量浓度为30 mg/L,羧苄青霉素最适抑菌质量浓度为200 mg/L;转基因抗性愈伤GUS组织化学染色及PCR鉴定结果表明,外源基因iaaM已导入并整合至黄花蒿基因组中。

• 单位
  湖南农业大学