重组胶质细胞生长因子2蛋白的原核表达及纯化

作者：薛亚军; 赵耀东; 董艳; 蔡如珏; 卢亦成; 楼美清

来源：生物医学工程与临床, 2012, (02): 181-185.

DOI：10.13339/j.cnki.sglc.2012.02.001

• 胶质细胞生长因子2
• 原核表达
• 蛋白纯化
• pET-32b glial growth factor 2
• prokaryotic expression
• protein purification
• pET-32b

目的通过原核表达的方法得到胶质细胞生长因子2(GGF2)重组蛋白。方法将不含信号肽编码序列的GGF2基因用亚克隆的方法自PVT-GGF2质粒克隆至PCXJ18质粒,再由PCXJ18-GGF2质粒克隆至pET-32b(+)质粒,构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。表达载体转染4种宿主菌,筛选合适者。优化表达时程和IPTG诱导剂量。GGF2大量表达后回收包涵体,复性。复性产物利用His Bind树脂进一步纯化。纯化产物用Western blot鉴定。结果测序鉴定表明,成功构建pET-32b(+)-GGF2表达载体。筛选结果表明Origami B(DE3)为合适宿主菌。适宜的表达条件为30℃...

• 单位
  上海长征医院; 同济大学