基于PI3K/Akt通路研究内皮祖细胞来源外泌体协同丹参酮ⅡA对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

作者：马露; 杨雷; 邓常清^*; 张伟^*; 丁煌; 刘晓丹; 李菀榆; 文江; 谭维; 李艳玲; 张燕燕; 傅馨莹; 刘林券; 刘彩霞; 曾昭文

来源：中国中药杂志, 2023, 48(23): 6423-6433.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20230828.701

• 冠心病
• 内皮祖细胞
• 外泌体
• PI3K/Akt通路
• 血管内皮细胞
• 丹参酮ⅡA

探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TaⅡA)协同内皮祖细胞来源外泌体(endothelial progenitor cell-derived exosomes, EPCs-exos)通过磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)通路对胸主动脉血管内皮细胞(aortic vascular endothelial cells, AVECs)氧化损伤的保护作用的分子机制。将1-棕榈酰基-2-(5′-氧-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱[1-palmitoyl-2-(5′-oxovaleroyl)-sn-glycero-3-phosphocholine, POVPC]诱导的AVECs随机分为模型组、TaⅡA组、EPCs-exos组和TaⅡA+EPCs-exos组，另取正常细胞作为对照组，细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)试剂盒检测LDH漏出率，Matrigel实验检测成管能力，DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(activated oxygen, ROS)水平，激光共聚焦显微镜检测内皮细胞骨架形态，ELISA检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α等炎性因子表达，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测PI3K和Akt的mRNA及磷酸化水平表达情况。结果显示，与对照组比较，模型组中细胞增殖及成管能力下降，LDH漏出率及ROS水平上升，细胞骨架破坏明显，IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达增加，PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平下降；与模型组比较，单用TaⅡA或EPCs-exos干预后，2组细胞增殖及成管能力上升，LDH漏出率及ROS水平下降，骨架破坏得到修复，IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子水平下降，PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平上升；与单用TaⅡA或EPCs-exos组比较，TaⅡA+EPCs-exos组细胞增殖及成管能力进一步上升，LDH漏出率、ROS水平、IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达都进一步下降，细胞骨架得到更好的修复，PI3K和Akt mRNA及磷酸化水平显著上升。研究表明，TaⅡA和EPCs-exos均能对POVPC诱导的AVECs产生保护作用，其机制与激活PI3K/Akt通路相关，而将两者联合应用，可以对治疗效果起协同增效作用。

• 单位
  湖南中医药大学; 湖南中医药大学第一附属医院