基于Tail-PCR分析AN2基因上游启动子活性

作者：宗渊; 韦国; 石光禹; 刘宝龙; 包雪梅^*

来源：热带亚热带植物学报, 2023, 1-8.

• 黑果枸杞
• 花青素
• AN2
• 启动子
• GUS染色

黑果枸杞(Lycium ruthenicum)富含花青素，AN2基因是调控黑果枸杞花青素合成代谢的主效基因。为解析AN2基因启动子的活性差异，采用Tail-PCR方法分别克隆了黑果枸杞和红果枸杞(L. barbarum) AN2基因起始密码子上游约1 686 bp (LrAN2p)和1 495 bp (LbAN2p)的序列。Plant CARE预测表明，LbAN2p和LrAN2p中分别有133和137个的顺式作用元件，其中，参与光调控的顺式元件分别有11和15个；参与激素响应相关的顺式元件分别有13和16个。构建AN2启动子植物表达载体pKGWFS7:LbAN2p和pKGWFS7:LrAN2p，利用农杆菌介导的烟草遗传转化体系获得转基因烟草。GUS染色结果表明，LrAN2p能够驱动GUS在烟草中的表达，叶片呈现蓝色，具有较LbAN2p更强的启动活性，qRT-PCR结果表明，LrAN2p转基因烟草中GUS基因具有更高的转录水平，这可能会使AN2基因在黑果枸杞中具有更高的表达，激活黑果枸杞花青素合成代谢通路。这为解析枸杞果色形成及AN2基因的表达调控机制奠定了理论基础。

• 单位
  中国科学院; 中国科学院华南植物园; 青海师范大学; 教育学院