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摘要
目的 探讨人骨髓间充质干细胞（h BMMSCs）外泌体来源的miR-335-5p调控DKK1对人牙周炎中牙周膜干细胞（PDLSCs）成骨分化的影响及其作用机制。方法 提取hBMMSCs外泌体，通过透射电镜、Western blot以及PKH67标记鉴定外泌体，通过TNF-α诱导PDLSCs构建牙周炎细胞模型。提取的外泌体与TNF-α诱导的PDLSCs共同培养。qRT-PCR检测miR-335-5p，促炎因子IL-1β、IL-6、IL-8和成骨标志基因RunX2、OCN、BMP-2 mRNA表达。茜素红和ALP染色检测钙结节，Western blot检测DKK1蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与DKK1的靶向关系。结果 提取的hBMMSCs外泌体中CD9和CD81显著表达（P<0.05）。hBMMSC外泌体降低TNF-α诱导的hPDLSCs中促炎细胞因子IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.05)的m RNA表达并促进成骨标志基因RunX2(P<0.01)、OCN(P<0.05)、BMP-2(P<0.001)mRNA和钙结节生成。miR-335-5p在hBMMSCs外泌体中高表达，过表达miR-335-5p靶向下调DKK1(P<0.001)，抑制促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8的表达（P<0.001），促进成骨标志物BMP-2、OCN、RunX2的mRNA表达以及钙结节生成（P<0.001）。结论 hBMMSC外泌体来源的miR-335-5p靶向下调DKK1，促进h PDLSCs成骨分化，抑制牙周炎的发展进程。
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