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摘要
目的:探索大鼠阴茎海绵体内皮细胞(CCECs)分离、纯化和培养的方法,观察其生长特性,并为勃起功能障碍的研究提供种子细胞。方法:采用0.1%弹性蛋白酶消化SD大鼠阴茎海绵体组织,分离原代SD大鼠CCECs,然后采用免疫磁珠纯化,进一步扩增,利用克隆环筛选出单克隆CCECs,并观察其形态及增殖特性,免疫荧光染色鉴定CCECs血管假性血友病因子(VWF)、免疫组化染色鉴定CCECs CD31分子,流式细胞仪测定CCECs纯度,CCK-8法检测CCECs细胞增殖并绘制生长曲线。结果:经克隆环筛选纯化培养1周后倒置相差显微镜下观察到CCECs生长汇合呈铺路石样改变。生长曲线显示CCECs最初12 d处于潜伏期,生长缓慢,34 d处于对数生长期,生长迅速,第6天进入平台期。免疫荧光染色检测CCECs VWF呈阳性,荧光显微镜下胞质内可见大量绿色荧光。免疫组化检测CCECs CD31分子呈阳性,倒置显微镜下胞质内可见大量黄褐色颗粒。流式细胞仪检测经磁珠联合克隆环纯化VWF标记的CCECs细胞阳性率可达(91.9±3.75)%。结论:免疫磁珠联合克隆环纯化法可成功培养出纯度高SD大鼠CCECs,并可在内皮细胞培养液中稳定生长及传代。
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