高危型人乳头瘤病毒HPV18 E6和E7基因的克隆与表达

作者：来永巍; 何红鹏; 刘翔; 范红艳; 姚佳宏; 王艳春^*

来源：中国研究型医院, 2018, 5(04): 23-28.

DOI：10.19450/j.cnki.jcrh.2018.04.006

• HPV18 E6、E7
• 基因克隆
• 质粒构建
• 基因表达

目的:HPV18 E6和E7是两个病毒癌基因,存在于宫颈癌He La细胞中。采用双酶切和同源重组两种不同的策略克隆HPV18 E6、HPV18 E7和HPV18 E6-E7串联表达质粒,研究两者在细胞癌变中的作用。方法:首先,从He La细胞中提取RNA,RT-PCR获取E6和E7编码序列,分别用双酶切连接法或同源重组的方法连入不同载体质粒。然后,从He La细胞中提取DNA,PCR法扩增E6-E7编码序列,酶切连接法构建重组表达质粒。结果:经测序正确的质粒转染He La细胞,使用RT-PCR法或者Western-blot法检测目的基因转录与表达均显著升高。结论:HPV18 E6、E7和E6-E7三个表达质粒构建成功,均可在He La细胞中正确表达。

• 单位
  生物工程学院; 天津科技大学; 吉林医药学院