亚砷酸钠及其代谢产物诱导16HBE细胞BCL2L2-PABPN1表达及机制探讨

作者：施雅; 尹锦瑶; 吴疆; 蒋成兰; 赵瑞欢; 周倩; 何越峰^*

来源：中国职业医学, 2022, 49(05): 522-529.

DOI：10.20001/j.issn.2095-2619.20221008

• 亚砷酸钠
• 融合基因
• B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)
• 多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)
• BCL2L2-PABPN1
• 细胞凋亡
• P53
• 信号通路

目的 探讨亚砷酸钠及其甲基化代谢产物诱导16HBE细胞融合基因B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)-多聚（A）结合蛋白核1(PABPN1)表达的差异及相关机制。方法 （1）分别以浓度为1.5、3.0、4.5μmol/L的亚砷酸钠染毒16HBE细胞（设为低、中、高剂量砷染毒组），以浓度为4.5μmol/L一甲基胂酸（MMA）、二甲基胂酸（DMA）和亚砷酸钠染毒16HBE细胞（设为MMA组、DMA组和亚砷酸钠组），并设无毒物刺激的对照组。培养48 h后，以实时荧光定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测BCL2L2-PABPN1的表达。（2）设计两种小干扰RNA(siRNA)沉默片段转染16HBE细胞，以敲减BCL2L2-PABPN1，分别设为siRNA-1组和siRNA-2组；另设无敲减BCL2L2-PABPN1转染的对照组。培养48 h后，以qRT-PCR检测3组细胞中BCL2L2-PABPN1的表达，分别以MTS法、JC-1线粒体膜电位检测法检测细胞存活率和早期凋亡率，以Hoechest33342/碘化丙啶（PI）双重染色法观察细胞凋亡情况，以蛋白质免疫印迹法检测P53信号通路相关蛋白表达。结果 （1）随着亚砷酸钠染毒剂量的增加，16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平增加（P<0.01）；高剂量砷染毒组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、低剂量砷染毒组和中剂量砷染毒组（P值均<0.05）。亚砷酸钠组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、MMA组和DMA组（P值均<0.05）；但对照组、MMA组和DMA组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平两两比较，差异均无统计学意义（P值均>0.05）。（2）siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中BCL2L2-PABPN1相对表达水平和细胞存活率均低于对照组（P值均<0.05）；但3组16HBE细胞早期凋亡率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Hoechest33342/PI双重染色结果显示，siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞核固缩和早期凋亡细胞的数量均较对照组增多。siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中P53、Ser392位点磷酸化P53、B淋巴细胞瘤-2相关死亡启动子、P21和细胞色素C的蛋白相对表达水平均高于对照组（P值均<0.05）,P53上调凋亡因子蛋白相对表达水平均低于对照组（P值均<0.05）。结论 亚砷酸钠可能通过诱导融合基因BCL2L2-PABPN1的表达，阻滞16HBE细胞凋亡；其机制与激活P53信号通路有关。亚砷酸钠甲基化代谢产物MMD和DMA对BCL2L2-PABPN1的表达无影响。BCL2L2-PABPN1可能通过BCL2L2和PABPN1基因的协同作用发挥抗凋亡效应。

• 单位
  昆明医科大学; 公共卫生学院