MAGE-3基因的表达、纯化及其抗血清的制备

作者：肖刚; 张文敏; 张萌; 谢丹; 郭爱林; 文剑明

来源：中山大学学报(医学科学版), 2005, 26(02): 176-179.

DOI：10.3321/j.issn:1672-3554.2005.02.014

• 黑色素瘤抗原-3
• 原核表达
• 重组蛋白
• 纯化
• 抗体

【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统进行分离纯化。用纯化的融合蛋白GST-MAGE-3免疫新西兰大白兔,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western-blot检测抗体活性。【结果】构建了pGEX-MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达-相对分子质量约为72×103的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-3的重组蛋白GST-MAGE-3。制备了兔抗GST-MAGE-3抗体。Western blot证实该抗体可与GST-MAGE-3蛋白特异性结合。【结论】获得了肿瘤抗原MAGE-3的纯化重组蛋白及其特异的多克隆抗体,为进一步研究MAGE-3抗原在肿瘤免疫治疗中的作用提供了一件检测工具。

• 单位
  中山大学中山医学院