人核糖核酸酶抑制因子基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

作者：刘鹏; 赵宝昌; 樊建慧; 田余祥; 杨帆; 崔秀云

来源：中国微生态学杂志, 2008, 20(06): 547-549.

DOI：10.13381/j.cnki.cjm.2008.06.006

• 人核糖核酸酶抑制因子
• 腺病毒载体
• 基因治疗 Human ribonuclease inhibitor
• Adenovirus vector
• Gene therapy

目的构建含有人核糖核酸酶抑制因子(hRI)基因的重组腺病毒载体。方法以含有全长cDNA的pT7-RI为模板,PCR扩增hRI,经T载体克隆后,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,在BJ5183细菌内和pAdEasy-1同源重组。筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增。通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果酶切鉴定及PCR结果证明hRI基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度为1.5×1010pfu/ml。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含hRI基因的重组腺病毒载体。

• 单位
  大连医科大学