高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：王雪平^*; 张孝俊; 李晓月; 王国栋; 张福良; 宋玉伟; 张明亮; 马磊

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(05): 2053-2060.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.05.032

• 禽腺病毒4型
• Hexon蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

【目的】原核表达禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)Hexon蛋白，并制备兔抗Hexon多克隆抗体，为FAdV-4 Hexon功能研究提供材料。【方法】采用基于PCR的长DNA序列准确合成(PCR-based accurate synthesis, PSA)方法，设计全长拼接引物，在引物两端各设计保护性碱基合成FAdV-4 Hexon基因；利用同源重组技术将其连接至pCzn1-Hexon表达载体，获得pCzn1-Hexon重组质粒进行原核表达，采用纯化重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗Hexon蛋白的多克隆抗体。以间接ELISA方法测定多克隆抗体效价；通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】重组原核表达质粒pCzn1-Hexon经双酶切及测序鉴定证明构建正确；获得的重组蛋白以包涵体的形式表达，分子质量约为41 ku;用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔后，通过间接ELISA方法检测抗体效价高达1∶512 000。以制备的多克隆抗体为一抗，通过Western blotting和IFA检测到鸡肝癌细胞(LMH)中的Hexon蛋白表达，表明制备的多克隆抗体能与Hexon蛋白发生特异性反应。【结论】FAdV-4 Hexon蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达，制备并纯化的抗Hexon多克隆抗体具有较高的反应性和特异性，该研究为进一步探究Hexon蛋白的生物学功能及其在FAdV-4感染和致病过程中的作用奠定了基础。

• 单位
  安阳工学院