太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究

作者：吴玲梅; 顾杰; 温智清; 贾鹏^*; 刘瑞婷; 蒋洁兰; 刘荭; 郑晓聪; 毛明光^*

来源：大连海洋大学学报, 2020, 35(01): 83-88.

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2020-023

• 太平洋鳕
• 抗菌肽
• 原核表达
• 亚细胞定位

为揭示太平洋鳕Gadus macrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性,利用qPCR法对平均体质量为2.438 kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨,分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体,研究了GmHep的体外表达特点。结果表明:GmHep基因开放阅读框长为297 bp,编码98个氨基酸,蛋白相对分子质量为10 833.56,该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽,成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键;氨基酸序列比对发现,GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%),但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%),预示其功能具有独特性;GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05);GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01 mmol/L、30℃、诱导4 h;GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明,本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体,确定GmHep为肝分泌型,且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。

• 单位
  深圳市检验检疫科学研究院; 大连海洋大学; 深圳海关动植物检验检疫技术中心