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摘要
目的：基于小鼠肺癌细胞/小鼠成肌细胞(Lewis/C2C12)体外共培养模型研究健脾和胃法六君子汤干预肿瘤微环境下细胞自噬的分子机制。方法：采用Lewis/C2C12共培养方法模拟肿瘤微环境，将细胞分为5组，分别为空白对照组、模型组、六君子汤组、抑制剂组、联合用药组。加药48 h后，MTT法检测六君子汤1 000μg/mL、抑制剂3μmol/L对两种细胞的影响；马血清诱导C2C12细胞分化，建立Lewis/C2C12细胞共培养体系；免疫荧光法检测C2C12细胞中肌肉蛋白重链MyHC的表达；电子显微镜下观察C2C12细胞中自噬体的变化；ELISA检测共培养条件下细胞上清中IL-6的含量；Western Blot法检测STAT3及Beclin1、LC3B/LC3A、泛素结合蛋白p62、ULK1的表达。结果：MTT结果显示六君子汤和抑制剂分别为1 mg/mL和3μmol/L的浓度符合肿瘤微环境模型要求；与空白对照组比较，模型组MyHC蛋白表达量显著下降(P<0.05)，上清中IL-6含量、STAT3、Beclin1、p62、LC3B/LC3A、ULK1蛋白表达量以及自噬体数量显著上升(P<0.05)。与模型组比较，各给药组MyHC蛋白表达量显著上升(P<0.05)，细胞上清中IL-6含量、STAT3、p62、LC3B/LC3A、ULK1蛋白表达均显著下降(P<0.05)，自噬体数量显著减少(P<0.05)。与六君子汤组比较，抑制剂组、联合用药组MyHC蛋白表达量显著上升(P<0.05)，细胞上清中IL-6下降，抑制剂组细胞p62、LC3B/LC3A表达量显著下降(P<0.05)，联合用药组p62表达显著下降(P<0.05)。结论：六君子汤可通过抑制自噬溶酶体途径的激活，逆转肿瘤恶病质肌肉萎缩，其机制可能与IL-6/STAT3信号通路有关。
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