本发明属于酶工程技术领域,公开了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶活性聚集体及其制备方法与应用。该D-阿洛酮糖-3-差向异构酶活性聚集体,包括D-阿洛酮糖-3-差向异构酶和自聚集短肽,可以提高D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的反应温度及半衰期;对金属离子的依赖性显著降低;重复利用次数提高。