TGF-β/miRNA/c-Ski在人冠脉内皮细胞中调控内皮-间充质转化的作用机制研究

作者：韩素霞; 吴晶晶; 李景峰

来源：贵州医药, 2021, 45(05): 679-681.

• 内皮-间充质转化
• 冠脉内皮细胞
• c-Ski
• TGF-β/Smad信号通路
• miRNA

目的分析TGF-β、miRNA以及c-Ski于人冠脉内皮细胞调控内皮-间充质转化(End-MT)的作用机制。方法以人冠状动脉内皮细胞为研究对象,构建基心肌纤维化细胞模型,设置空白对照组,采取0 ng/mL、1 ng/mL、2.5 g/mL及5 ng/mL几种浓度梯度TGF-β1诱导冠脉内皮细胞,经慢病毒c-SKI载体传染细胞与动物,经免疫印迹法对c-SKI于End-MT细胞内的表达情况开展检测,分析过表达C-SKI对于End-MT有关分子标志物影响,结合在线软件及生物信息学分析,筛选可靶向结合c-SKI3′-UTR的microRNA,使用双荧光素酶报告验证其结合及调控关系。结果不同浓度TGF-β1组作用48 h之后,c-SKI表达呈现剂量依赖性降低,和空白对照组比较,5μg/L组c-SKI表达降低最明显(P<0.05)。和对照病毒感染+TGF-β1组比较,C-SKI基因感染+TGF-β1组冠脉内皮细胞内vimentin与a-SMA蛋白表达明显下降,E-ead蛋白表达升高(P<0.05)。和对照病毒感染+TGF-β1组比较,C-SKI基因感染+TGF-β1组p-Smad2与p-Smad3蛋白水平明显下降(P<0.05)。MiR-200a mimics转染后和对照组比较miR-200a表达明显上升(P<0.05)。1 ng/mL、2.5 g/mL及5 ng/mL浓度TGF-β1组与0 ng/mL浓度TGF-β1组对比,CD31与FSP1蛋白表达显著上升;于1 ng/mL、2.5 g/mL浓度TGF-β1组和0 ng/mL浓度TGF-β1组中,miR-200组和对照组比较,其CD31及VEcadherin蛋白表达显著上升(P<0.05),a-SMA与FSP1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论于End-MT时C-SKI表达下调,C-SKI过表达可抑制冠脉内皮End-MT,机制可能和对TGF-β1/Smad信号通路的活性调控相关。miR-200a能抑制End-MT过程,作用机制可能和靶向抑制HMGB1对TGF-β1产生调控作用有关。

• 单位
  上海市浦东新区人民医院