科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
为考察APPswe基因的表达对细胞生长和凋亡作用的影响,本研究采用gateway分子重组技术构建表达APPswe基因的慢病毒质粒,并将该质粒转染至SH-SY5Y细胞中。用RT-PCR和Western blot技术分别测定APPswe基因的mRNA转录和蛋白翻译水平。活细胞计数法和细胞外乳酸脱氢酶法分别测定细胞存活力和细胞膜损伤程度。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术测定细胞凋亡水平,Hoescht 33342染色观察细胞核形态变化,DCFH-DA染色法测定胞内活性氧水平。转录和翻译水平的验证表明,APPswe基因能够在SH-SY5Y细胞中相对稳定地表达。表达APPswe基因后,细胞的存活能力降低,损伤程度增加,细胞内活性氧水平上升,细胞核浓缩聚集,细胞发生凋亡反应。试验结果表明,APPswe基因的表达对SH-SY5Y细胞生长产生抑制作用,造成细胞损伤和凋亡,表达APPswe基因的SH-SY5Y细胞系可应用于体外AD病理发生机制和药物作用的研究。
- 单位
