逆转MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统的构建和鉴定

作者：钟琦; 黄志刚; 房居高; 陈晓红; 张伟; 黑虎; 王鸿; 韩德民

来源：中国耳鼻咽喉头颈外科, 2007, (09): 505-509.

• 抗药性,多药
• 喉肿瘤
• RNA干扰
• 慢病毒属
• 遗传载体

目的构建并鉴定表达MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统并检测其对于喉癌多药耐药细胞系(LSC-1/TAX)多药耐药表型的逆转效果。方法根据MDR-1基因序列,设计3条寡聚核苷酸序列,合成互补DNA链,插入慢病毒表达质粒pLVTHM中,与pCMV-dR8.74和pMD2G共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。以RT-PCR、realtimePCR及Westernblot方法检测三条siRNA在人喉癌耐药细胞系(LSC-1/TAX)中的干扰效率,并采用MTT方法检测干扰前后化疗药物的敏感性。结果通过酶切和测序证实慢病毒载体构建正确,产生能够表达GFP和siRNA的慢病毒颗粒,浓缩滴度为>1×108TU/ml。三条siRNA均可以感染LSC-1/TAX细胞系,其中第三条siRNA敲减效果最佳。结论成功建立逆转MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统,为逆转喉癌多药耐药表型的实验奠定了基础。

• 单位
  北京市耳鼻咽喉科研究所; 首都医科大学附属北京同仁医院