人胃癌HGC-27细胞中过表达生物钟蛋白CRY1对细胞内cAMP生成的抑制作用

作者：黄钱武; 徐蕾^*

来源：齐齐哈尔医学院学报, 2019, 40(16): 1981-1985.

• 人胃癌HGC-27细胞
• CRY1
• cAMP

目的建立稳定过表达生物钟蛋白CRY1的人胃癌细胞系,并检测CRY1过表达对细胞内cAMP生成造成的影响。方法克隆CRY1基因,构建出过表达CRY1基因的慢病毒穿梭质粒。制备并浓缩过表达CRY1的慢病毒颗粒,用其感染人胃癌HGC-27细胞,筛选获得稳定过表达CRY1的细胞系。对过表达CRY1的细胞及未过表达的对照组细胞给予异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)刺激,检测两组细胞内c AMP含量的变化的差异。结果成功构建过表达生物钟蛋白CRY1的人胃癌细胞系。Real-Time RT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组细胞内CRY1 mRNA表达量高出约64倍。Western blotting结果显示,相对于对照组,过表达组细胞内CRY1蛋白表达量高出近4倍。在受到ISO刺激后,过表达组细胞的c AMP的生成量相对于对照组明显较少。结论在人胃癌HGC-27细胞中过表达生物钟蛋白CRY1,显著抑制了ISO刺激下细胞内cAMP的生成。

• 单位
  基础医学院; 皖南医学院