摘要
目的研究NMDA受体NR2A亚单位羧基末端(以下简称为C末端)不同部位缺失对该受体表面表达和功能的影响.方法以GFP-NR2A为起始质粒构建了4个依次缺失部分C末端的GFP标记的NR2A亚单位表达载体:NR2A-△C1(缺失897L至1017S)、NR2A-△C2(缺失1024D至1142P)、NR2A-△C3(缺失1149D至1347G)及NR2A-△C4(缺失1354S至1464V);通过活细胞免疫化学染色分析这些载体与NR1-1a亚单位共转染后在HEK293细胞和海马神经元的表面表达,并通过电生理检测转染HEK293细胞NMDA受体的功能. 结果当NR2A-△C1、NR2A-△C2、NR2A△C3、NR2A-△C4分别与NR1-1a共转染HEK293细胞时,均可获得细胞膜表面表达,其表面染色阳性的细胞在绿色荧光蛋白细胞中的百分比与共转染NR1-1a/GFP-NR2A时的百分比相比均无显著性降低;并且NR1-1a/NR2A-△C2或NR1-1a/NR2A-△C4转染的HEK293细胞均能记录到谷氨酸诱发的NMDA受体通道电流.在海马神经元中,当转染NR2A-△C1、NR2A-△C2或NR2A-△C3时,单位长度树突表面表达的受体簇数量均显著低于转染GFP-NR2A的神经元,而转染NR2A-△C4的树突表面表达的受体簇数量却无显著性降低.结论在HEK293细胞中,C末端部分缺失的NR2A亚单位不影响含NR2A亚单位的NMDA受体在膜表面表达;而在海马神经元中,含NR2A的NMDA受体的表面表达数量受NR2AC末端的调控.
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