牛病毒性腹泻病毒通用型RT-PCR检测方法的建立

作者：郭春娟; 吴星星; 王璐; 季新成; 冉多良; 买买提·黑牙斯丁; **栋; 熊浩

来源：新疆农业大学学报, 2012, (03): 217-221.

• 牛黏膜腹泻病毒
• 5&rsquo
• -UTR
• 一步法RT-PCR
• 检测 bovine virus diarrhea/mucosal
• 5'-UTR
• one-step RT-PCR
• detection

为建立一种快速、特异、简便的检测牛病毒粘膜腹泻病病毒Ⅰ、Ⅱ型抗原的通用RT-PCR方法,根据GenBank上已发表的牛病毒性粘膜腹泻病毒(BVDV)Ⅰ、Ⅱ型5’端非编码区保守序列设计合成了两条引物,其中上游引物为兼并引物。应用一步法RT-PCR技术分别对Ⅰ(Oregon C24V)、Ⅱ型(279)标准株进行扩增,将PCR产物胶回收后连与pMD18-T载体,经PCR、酶切鉴定条带均正确(288bp),测序结果与预期一致。同时设牛疱疹病毒Ⅰ型、牛传染性鼻气管炎、猪瘟病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、MDBK细胞作对照,结果均为阴性;并对新疆各地州的样品进行检测。优化反应条件后,检测其灵敏度为10-1 TCID50/mL。经对400份临床样品检测,阳性检出率为10.75%,明显高于ELISA检测。试验表明,该方法具有特异、灵敏、高效、快速、重复性好等特点,可用于牛病毒粘膜腹泻病的临床检测及流行病学检测。

• 单位
  新疆农业大学; 新疆出入境检验检疫局