猪流行性腹泻病毒3C样蛋白酶(3CLpro)的真核表达及生物信息学分析

作者：梁荣; 丁芳艺; 宋海鑫; 张金秋^*; 费荣梅^*

来源：畜牧与兽医, 2020, 52(09): 80-87.

• 猪流行性腹泻病毒(PEDV)
• pro)" name="keyword">3C样蛋白酶(3CLpro)
• 真核表达
• 生物信息学

3C样蛋白酶(3CLpro)是冠状病毒的主蛋白酶,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。本研究旨在对猪流行性腹泻病毒3C样蛋白酶(PEDV 3CLpro)进行真核表达,并对其结构和功能进行生物信息学分析。根据GenBank上PEDV 3CLpro基因的序列设计并合成特异性引物,通过RT-PCR方法进行3CLpro基因的扩增,亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体中,并转染至HEK 293T细胞,通过荧光观察和Western blot鉴定该蛋白的表达。并利用生物信息学软件对3CLpro进行序列分析、结构和功能预测。结果显示:PEDV 3CLpro能够在真核细胞中稳定高效表达,大小约为43 kDa,共编码302个氨基酸,分子式为C1446H2250N400O437S15,亲水性平均系数为0.058,不稳定指数为33.19,含有丰富的糖基化位点及磷酸化位点。其二级结构包含20.53%的α螺旋、38.41%的β折叠以及41.06%的无规则卷曲,对应的2个催化位点分别为41位的组氨酸(His)和144位的半胱氨酸(Cys)。上述结果为进一步研究PEDV 3CLpro在病毒与宿主互作中的生物学功能提供数据支撑。

• 单位
  江苏省农业科学院; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心