大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1 pRNAT-U6.2小干扰RNA表达载体的构建

作者：田力; 李继昌; 陈奎生

来源：郑州大学学报(医学版), 2007, (02): 234-236.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2007.02.015

• 基质金属蛋白酶抑制因子-1
• 小干扰RNA
• pRNAT-U6.2表达载体 matrix metalloproteinase inhibitor-1
• siRNA
• pRNAT-U6.2 express vector

目的:构建大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)小干扰RNA的真核表达质粒pRNAT-U6.2 siRNA。方法:依据siRNA设计原则确定以序列447~465nt、522~540nt、142~160nt为TIMP-1 siRNA靶序列,体外分别合成两端含BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后克隆于pGEM-T载体,T7和SP6为引物进行PCR鉴定;双酶切pGEM-T将其定向克隆到siRNA表达载体pRNAT-U6.2,用pRNAT-U6.2的插入鉴定引物进行PCR鉴定,阳性重组质粒测序。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入真核表达载体pR-NAT-U6...

• 单位
  河南中医学院第三附属医院; 郑州大学第一附属医院