嗜热革节孢内切葡聚糖酶EGⅠ中精氨酸Arg7的功能分析

作者：于伟帅; 李多川^*

来源：山东农业科学, 2020, 52(02): 19-26.

DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2020.02.004

• 嗜热革节孢
• 内切葡聚糖酶
• 饱和突变
• 酶学性质
• 热稳定性

本研究将嗜热革节孢GH45家族内切葡聚糖酶EGⅠ中的底物结合位点精氨酸Arg7进行饱和突变,测定其性质、动力学参数的变化,以期分析精氨酸Arg7的功能。结果表明,与原酶相比,突变酶R7A的Km有所下降,R7P的kcat显著性提高,但突变酶的kcat/Km均显著性降低。原酶的最适反应温度为50℃,突变酶R7C、R7P和R7V的则为40℃,其余突变酶的均为50℃。原酶于70℃下处理2 h具有61%的活性,相同处理条件下,突变酶R7F、R7H仍具有70%以上的活性,说明其热稳定性明显提高,R7A仅有20%的活性,剩余突变酶均有40%左右的活性。原酶的反应最适pH值为5. 0,而突变酶R7C的为6. 0,剩余突变酶的均为5. 0。本试验探究了精氨酸Arg7饱和突变后嗜热革节孢GH45家族内切葡聚糖酶的性质变化,可为GH45家族进一步的分子改造和功能研究提供参考。

• 单位
  山东农业大学