连翘水提液体外抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对细胞凋亡的保护作用

作者：张凯照; 许泽锴; 肖仕鑫; 郑钰; 胡会; 崔红杰; 吴异健; 黄小红^*

来源：应用与环境生物学报, 2023, 29(02): 364-369.

DOI：10.19675/j.cnki.1006-687x.2022.01043

• 连翘
• 番鸭呼肠孤病毒
• 病毒增殖
• 细胞凋亡

连翘是中药配方的重要组分之一，具有良好的抗病毒活性，但其对番鸭呼肠孤病毒（MDRV）的作用尚未得到深入评估.为评估连翘体外MDRV增殖及对鸡胚成纤维细胞（DF-1）细胞凋亡的保护作用，通过四唑盐（MTT）法检测连翘水提液的安全浓度，并从3种给药方式中筛选出连翘水提液的最佳给药方式.在最佳给药方式下，通过半数细胞培养感染剂量（TCID50）检测MDRV在DF-1细胞的增殖情况，并采用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染法检测细胞凋亡，实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因mRNA的表达情况.结果显示，连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度为0.25-4 mg/mL，最佳给药方式是先感染病毒再加中药，在此给药方式下，连翘水提液能极显著降低MDRV在24-48 h的病毒滴度（P <0.01）.与对照组相比，MDRV攻毒组细胞凋亡率极显著升高（P <0.01），内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著上调（P <0.01），凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著上调（P <0.01）而Bcl-2表达极显著下调（P <0.01）；与MDRV攻毒组相比，连翘水提液处理组细胞凋亡率极显著降低（P<0.01），内质网应激相关基因IRE1、ATF6和PERK表达极显著下调(P <0.01)，凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达极显著下调（P <0.01）而Bcl-2表达极显著上调（P <0.01）.可见，连翘可以抑制MDRV在DF-1细胞中的增殖，并对MDRV引起DF-1细胞凋亡起到了缓解作用，具有良好抗病毒的活性，结果为进一步筛选出抗MDRV的候选药物提供了基础数据.（图7表1参24）

• 单位
  动物科学学院; 福建农林大学