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摘要
从齐齐哈尔市大豆根围土壤中分离得到1株木霉菌株TR673,经分子生物学及形态学鉴定，确定其为橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride)。采用崩溃酶对TR673的菌丝体进行裂解制备原生质体，分别采用50℃水浴5 min和紫外线照射(20 W、40 cm)90 s对原生质体进行灭活，再将灭活的原生质体用聚乙二醇融合法进行融合，并对TR673原生质体的制备和再生条件进行了优化。结果表明，用20 g·L-1的崩溃酶对培养16 h的TR673菌丝体酶解(裂解)5 h时，原生质体产量最大，达到1.2×106个·mL-1。用ZS1培养基对原生质体进行再生培养，其再生率可达12.3%。融合菌株TR673-3的哌珀霉素产量达1 282.67 mg·L-1,较原始菌株TR673的哌珀霉素产量提高了18.11%。本研究为后续的橘绿木霉基因组的编辑、转化以及其它木霉菌原生质体的制备、再生与融合等实验提供了参考依据。
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单位上海万力华生物科技有限公司
