大鼠Hes1腺病毒表达载体构建及功能鉴定

作者：周学亮; 方义湖; 赵勇; 邹斌; 徐华; 刘季春

来源：重庆医学, 2017, 46(05): 583-585.

• 腺病毒科
• 肌细胞,心脏
• Hes1
• 质粒构建
• 病毒包装

目的构建高滴度大鼠Hes1腺病毒过表达载体(Ad-Hes1)。方法以大鼠cDNA文库为模板,PCR法扩增Hes1,通过定向克隆构建pShuttle-CMV-Hes1穿梭质粒,再以pShuttle-CMV-Hes1为基础,构建pAdeno-Hes1病毒质粒,将pAdenoHes1转染293细胞,包装Ad-Hes1,利用改进TCID50法进行病毒滴度测定。Ad-Hes1感染H9c2心肌细胞,Western blot检测Hes1表达。结果pShuttle-CMV-Hes1穿梭质粒、pAdeno-Hes1病毒质粒构建成功,总滴度为1.6×1011 PFU,Ad-Hes1可在H9c2心肌细胞内正常表达,其MOI值为30。结论 Ad-Hes1包装成功,为进一步研究Hes1的心肌保护作用奠定实验基础。

• 单位
  南昌大学第一附属医院