基于JNK信号通路探讨针刺血清对H2O2诱导的RSC96雪旺细胞凋亡的保护作用及机制

作者：韩易言; 马铁明^*; 陈怡然; 田辉

来源：时珍国医国药, 2023, 34(02): 463-467.

• 针刺疗法
• 雪旺细胞
• 细胞凋亡
• c-Jun氨基末端激酶信号通路
• 坐骨神经损伤

目的 探讨针刺血清通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对过氧化氢(H2O2)诱导的RSC96雪旺细胞凋亡的保护作用。方法 选用雄性SD大鼠15只，分为治疗组(n=5)和空白组(n=10)。治疗组通过钳夹法建立坐骨神经挤压性损伤大鼠模型并采用针刺治疗后采集制备针刺血清，空白组接受假手术并采集血清。将RSC96雪旺细胞分为对照组(Control组)、模型组(H2O2组)、针刺组(H2O2+Acupuncture serum组)以及抑制剂组(H2O2+Acupuncture serum+SP600125组),每组3个复孔，分别给予相应处理。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，采用酶联免疫(ELISA)法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)水平，采用免疫荧光法测定S100、Cleaved Caspase-3蛋白表达定位，采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定各组RSC96细胞JNK通路相关蛋白表达水平。结果 与模型组比较，针刺组RSC96细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率较低(P<0.05),培养24 h、36 h时RSC96细胞上清液TNF-α水平较低，且培养36 h时TNF-α水平<培养24 h时TNF-α水平(P<0.05),裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白的荧光强度较低(P<0.05),RSC96细胞磷酸化-c-Jun(p-c-Jun)、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8蛋白表达水平较低，B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值较高(P<0.05);抑制剂组RSC96细胞磷酸化-JNK(p-JNK)、p-c-Jun、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8蛋白表达水平较低，Bcl-2/Bax蛋白比值较高(P<0.05)。与针刺组比较，抑制剂组p-c-Jun、Cleaved Caspase-8蛋白表达水平较低，Bcl-2/Bax蛋白比值较高(P<0.05)。结论 针刺血清能有效减少H2O2诱导的RSC96雪旺细胞凋亡，抑制TNF-α生成，保护RSC96细胞，其作用可能与抑制JNK信号通路并调控相关蛋白表达有关。

• 单位
  辽宁中医药大学