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摘要
以苜蓿基因组DNA为模板,利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物和模板)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合苜蓿的最佳ISSR反应体系:20μL反应体系中加83.4 nkat Taq酶,2.0 mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.0μL,0.4 mmol/L dNTP,0.2 mmol/L引物,2.5 ng DNA模板.PCR扩增反应程序为:94℃预变性4 min(94℃变性1 min,45~53℃退火1 min,72℃延伸1 min)40个循环,于72℃延伸7 min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高...
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单位黑龙江省畜牧研究所; 齐齐哈尔大学
