融合蛋白人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在原核细胞中的表达

作者：刘秀红; 李宁; 武彦宁; 赵焕英; 李莉

来源：北京医学, 2014, 36(06): 450-453.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2014.06.048

• 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3
• 基因表达
• 融合蛋白

目的构建人类磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)重组原核表达载体。方法以人类肝脏cDNA文库为模板扩增出GPC3基因产物,与pMD-18 simple T载体进行连接构建出T克隆载体;从T载体上获取基因片段,并对pET-32a(+)空载体进行双酶切,用T4连接酶连接,构建出pET-32a(+)-GPC3原核表达载体;对构建好的载体再次测序,并进行诱导表达。结果 PCR产物长度为837 bp,即扩增的GPC3 C末端长度,与NCBI网站的相比较,序列完全一致,说明pET-32a(+)载体中正确插入了目的片段,并且诱导表达出蛋白。结论成功构建了融合表达Pet-GPC3载体,蛋白诱导表达成功。

• 单位
  首都医科大学; 首都医科大学附属北京佑安医院; 北京市肝病研究所