弓形虫pcDNA3.1（+）-Flag-ROP18质粒构建及对RAW264.7细胞凋亡影响研究

作者：刘俊; 孙涛^*

来源：热带医学杂志, 2021, 21(09): 1125-1237.

• 弓形虫
• ROP18蛋白
• 凋亡

目的构建pcDNA3.1(+)-Flag-ROP18真核表达载体,体外研究弓形虫ROP18蛋白是否具有抑制H2O2诱导RAW264.7细胞凋亡的作用。方法通过PCR扩增ROP18基因,构建pcDNA3.1(+)-Flag-ROP18真核表达载体,转染RAW264.7细胞,为重组质粒组;并设置未含POP18基因的空白质粒为对照组。分别检测重组质粒组与对照组线粒体及细胞质中细胞色素c含量。结果成功构建pcDNA3.1(+)-Flag-ROP18重组质粒,通过双酶切鉴定,得到2个符合预期大小的条带。使用H2O2分别诱导重组质粒组与对照组对RAW264.7细胞的凋亡作用,分别检测线粒体及细胞质中细胞色素c含量,发现两组细胞色素c含量水平无区别。结论 ROP18没有抑制H2O2经线粒体途径诱导RAW264.7细胞凋亡,为进一步探索ROP18蛋白功能及弓形虫病的发病机制提供了理论依据。

• 单位
  邵阳学院附属第一医院; 邵阳市中心医院