人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定

作者：赵善超; 姜勇; 刘靖华; 李志杰; 邓鹏; 张桂林; 刘志强; 张训; 侯凡凡; 郑少斌

来源：第一军医大学学报, 2005, 25(07): 769-773.

DOI：10.3321/j.issn:1673-4254.2005.07.003

• 晚期糖基化终产物
• 原核表达
• 受体
• 受体
• 可溶性
• 融合蛋白/生物活性 advanced glycation end products
• receptor
• prokaryotic expression
• receptor
• soluble
• fusion protein/biological activity

目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗...

• 单位
  南方医科大学南方医院; 南方医科大学