基于重组酶聚合酶扩增技术建立实时荧光法快速检测鲍曼不动杆菌的研究

作者：刘爽; 黄广涛; 龚雅利; 金晓君; 蒙雨丹; 赵军宁; 杨莉; 彭毅志; 李晓鲁^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(03): 311-314.

DOI：10.13350/j.cjpb.190312

• 鲍曼不动杆菌
• 重组酶聚合酶扩增技术
• 16S-23S rRNA ITS基因
• 快速检测

目的建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification RPA)快速鉴定鲍曼不动杆菌的实时荧光检测方法。方法根据鲍曼不动杆菌16S-23S rRNA ITS基因特异保守序列设计RPA引物与探针,采用铜绿假单胞菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌4种非鲍曼不动杆菌作为对照进行鲍曼不动杆菌实时荧光RPA特异性验证;对菌液进行梯度稀释后提取模板,验证方法的灵敏性;采用RPA检测30株鲍曼不动杆菌临床分离株,以验证方法的临床应用性。结果建立的RPA扩增方法在42℃条件下18 min内完成对鲍曼不动杆菌的快速检测,与对照菌相比,仅鲍曼不动杆菌呈现典型的扩增曲线;RPA检测鲍曼不动杆菌最低检出限为2.86 cfu/ml菌液,与PCR及实时荧光PCR结果一致。30株鲍曼不动杆菌临床分离株RPA检测均出现扩增曲线,检出率为100%。结论建立的鲍曼不动杆菌实时荧光RPA方法具有高特异、灵敏、简便、迅速等优点,可用于鲍曼不动杆菌感染快速检测。

• 单位
  西南医科大学; 四川省中医药科学院