miR-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼外周血Th17细胞的免疫调控作用

作者：高敏; 赵璐; 陈思思; 魏瑞华; 粘红^*

来源：中华实验眼科杂志, 2022, 40(08): 716-723.

• 干眼
• 干燥综合征
• Th17细胞
• miR-31-5p
• 动物模型
• 外周血单个核细胞

目的探讨慢病毒介导微小RNA(miR)-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼模型外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用。方法构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装miR-31-5p过表达及其对照慢病毒, 进行浓缩和滴度测定。建立兔自身免疫性干眼模型, 并分离模型兔外周血单个核细胞(PBMC), 分别感染miR-31-5p及阴性对照慢病毒颗粒作为miR-31-5p过表达组和对照组, 采用实时荧光定量PCR法检测miR-31-5p的表达水平。将2个组PBMC与经γ射线照射后的泪腺上皮细胞共培养, 采用实时荧光定量PCR法检测2个组PBMC中Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)、标志性细胞因子白细胞介素-17(IL-17)及Th17细胞极化相关细胞因子IL-1β、IL-6和IL-23的mRNA表达水平;采用Western blot法检测PBMC中IL-17的蛋白表达水平。结果通过测序验证, 成功构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装并浓缩miR-31-5p过表达和对照慢病毒颗粒, 滴度测定结果分别为3.82×107 TU/ml和3.50×107 TU/ml, 满足后续实验需求。实时荧光定量PCR结果显示, miR-31-5p过表达组miR-31-5p相对表达量较对照组显著升高, 差异有统计学意义(t=-9.696, P<0.001)。在兔泪腺上皮细胞与PBMC共培养体系中, miR-31-5p过表达组PBMC中的RORC、IL-17 mRNA相对表达量分别为0.33±0.03和0.28±0.09, 明显低于对照组的1.00±0.00和1.00±0.00, 差异均有统计学意义(t=46.256、13.810, 均P<0.05)。Western blot检测结果显示, miR-31-5p过表达组PBMC中IL-17蛋白相对表达量较对照组明显降低, 差异有统计学意义(t=4.977, P=0.008)。实时荧光定量PCR结果显示, miR-31-5p过表达组PBMC中IL-6、IL-23和IL-1β mRNA相对表达量较对照组显著下降, 差异均有统计学意义(t=220.076、6.641、13.271, 均P<0.05)。结论 miR-31-5p过表达可能通过下调免疫微环境中IL-6、IL-23、IL-1β等细胞因子的表达负向调控Th17细胞免疫反应。

• 单位
  天津医科大学眼科医院; 天津医科大学