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摘要
目的观察参附益心方在缺氧条件下对原代心肌细胞葡萄糖利用的作用。方法取新生1～3天的SD乳鼠,进行原代心肌细胞分离、培养、鉴定,利用缺氧条件建立原代心肌细胞模型,筛选参附益心方0.25、0.5mg/ml、辅酶Q10 1×10-4mol/L进行干预,实验共设5组:正常组,模型组,参附益心方低剂量组(0.25mg/ml)、高剂量组(0.5mg/ml)和辅酶Q10组(1×10-4mol/L),试剂盒检测各组ATP含量及乳酸脱氢酶(LDH)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)基因表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GLUT-4蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组原代心肌细胞ATP含量及GLUT-4基因与蛋白表达含量明显降低, AMPK、PDH基因表达及LDH含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,参附益心方高剂量组可提高缺氧条件下原代心肌细胞ATP含量与GLUT-4基因和蛋白表达,降低AMPK和PDH的基因表达及LDH含量(P<0.05,P<0.01);参附益心方低剂量组可降低心肌细胞LDH含量,提高GLUT-4基因和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。参附益心方对心肌细胞ATP和LDH含量、AMPK和PDH基因表达,GLUT-4基因和蛋白表达作用呈剂量依赖性。结论参附益心方可通过提高缺氧条件下原代心肌细胞GLUT-4基因和蛋白表达,并降低LDH含量、回调心肌AMPK和PDH的基因表达,从而提高缺氧条件下原代心肌细胞葡萄糖的利用,改善心肌ATP储备。
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