硫色曲霉β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的组成型分泌表达

作者：李松瑜; 陈小玲; 王军军; 曹云鹤; 董冰

来源：生物技术通讯, 2009, (01): 12-14.

• β-甘露聚糖酶
• 毕赤酵母
• 组成型表达 β-mannanase
• Pichia pastoris
• constitutive expression

目的:构建硫色曲霉β-甘露聚糖酶的毕赤酵母组成型分泌表达菌株,研究重组菌株的产酶水平。方法:EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切质粒pPIC-mann-opt,琼脂糖凝胶电泳、回收目的基因片段后,与组成型毕赤酵母表达载体pGAPzαA连接,转化大肠杆菌,经筛选获得含有pGAP-mann-opt的重组克隆;提取pGAP-mann-opt,用限制性内切酶BspHⅠ线性化后,转化毕赤酵母X-33感受态细胞,进行Zeocin抗性筛选和PCR鉴定。结果:获得了重组菌株,重组菌株在YPD培养基中摇瓶发酵24h,上清液酶活达到343U/mL,产酶蛋白约为1.0mg/mL。结论:构建的硫色曲霉β-甘露聚糖酶组成型表达菌...

• 单位
  中国农业大学; 动物营养学国家重点实验室