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摘要
目的建立体外神经元损伤模型,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对损伤神经元存活的保护作用,了解bFGF对神经元的作用和机制,为神经损伤提供新的治疗措施。方法在体外培养10 d的海马神经元中加入50μmol/L的谷氨酸,相差显微镜下观察细胞形态变化,用苔盼蓝染色法检测存活率和细胞凋亡原位(TUNEL)检测凋亡率,来评定谷氨酸对海马神经元的损伤程度。以低浓度谷氨酸诱导神经元凋亡,应用免疫组化、苔盼蓝染色法和TUNEL检测等技术,在实验组中加入bFGF(20 ng/ml),观察bFGF对损伤神经元存活的保护作用以及caspase-3基因在损伤神经元中的表达情况。结果谷氨酸作用于海马神经元4 h后,可见部分细胞变圆,胞体肿胀,突起缩短或消失;24 h后大部分肿胀细胞崩解。通过苔盼蓝染色法检测神经元存活率,实验组神经元存活率〔(83.8±6.8)%〕与对照组〔(77.4±6.5)%〕比较,差异有统计学意义(t=8.52,P<0.05);谷氨酸作用于海马神经元24 h后,TUNEL检测显示凋亡神经元表面皱缩,体积缩小,胞核固缩。实验组神经元凋亡率〔(1.5±0.7)%〕与对照组〔(2.7±1.4)%〕比较,差异有统计学意义(t=-10.35,P<0.05)。凋亡后3 d内3组的神经元存活率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中正常组较实验组和对照组神经元存活率均显著增加,实验组较对照组亦显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。凋亡后3 d内3组的神经元凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中正常组较实验组和对照组神经元凋亡率均显著减少,实验组较对照组亦显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。凋亡后3d内3组caspase-3基因阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),正常组较实验组和对照组caspase-3基因阳性表达率均显著减少,实验组较对照组亦显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在神经元中加入bFGF后,神经元存活率升高,神经元凋亡率和caspase-3基因阳性表达率降低,提示bFGF对损伤神经元有保护作用。bFGF可能是通过减少caspase-3通路激活,进而抑制神经元凋亡,从而发挥对神经元的保护作用。
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单位遵义医学院附属医院; 南昌大学
