基于猪丁型冠状病毒重组蛋白N间接ELISA检测方法的建立与初步应用

作者：刘磊; 秦毅斌; **伟; 赵武; 段群棚; 全琛宇; 赵硕; 许心婷; 陈婷婷; 梁家幸; 周英宁; 许艺兰; 李斌; 蒋冬福; 卢敬专; 何颖^*; 卢冰霞^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(11): 1347-1354.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0187

• 猪丁型冠状病毒
• N蛋白
• 间接ELISA

为建立快速、准确的猪丁型冠状病毒（PDCoV）抗体ELISA检测方法，本研究以重组蛋白N作为包被抗原，建立了PDCoV间接ELISA抗体检测方法。结果显示，经条件筛选，确定了该ELISA最佳反应条件：重组蛋白每孔包被0.2μg；待检血清1∶80稀释，孵育60 min；酶标二抗1∶4 000稀释，反应30 min；底物显色10 min。待检血清样品S/P值>0.200时判定为阳性，S/P值<0.173时判定为阴性，S/P值介于0.173和0.200之间则判为可疑。特异性试验结果表明，该检测方法不与HCV、FMDV、PRRSV、PRV、TGEV和PEDV的阳性血清发生交叉反应；重复性试验结果显示，批内变异系数为0.79%～4.75%，批间变异系数在1.92%～6.60%之间，表明重复性良好；敏感性试验结果显示，该方法可检测到血清最大稀释度为1∶320。符合率试验结果显示，本方法与中和试验检测结果符合度高，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为86.36%、96.43%和92.00%。利用本研究建立的ELISA方法对456份采自广西地区不同阶段猪群的血清样品进行检测，结果显示，总体样品阳性率为40.40%，不同阶段猪群抗体阳性率有较大区别，后备母猪的阳性率可高达100%，保育猪阳性率最低仅为3.90%。

• 单位
  广西农业职业技术学院; 广西壮族自治区兽医研究所