微环DNA载体介导的shRNA在HBV转基因小鼠中的抗病毒作用

作者：李秀梅; 刘光泽; 谢勇; 孔祥平

来源：解放军医学杂志, 2017, 42(11): 979-984.

DOI：10.11855/j.issn.0577-7402.2017.11.08

• 微环载体
• shRNA
• 转基因小鼠
• 乙型肝炎

目的探讨微环DNA载体介导的shRNA对HBV转基因小鼠体内乙肝病毒复制及表达的抑制效应。方法采用分子克隆技术制备靶向HBV基因的shRNA通用质粒p U6-shRNA HBV和微环shRNA质粒p MC-U6-shRNA HBV。将HBV转基因小鼠随机分为微环shRNA组、通用质粒shRNA组和无关质粒对照组,利用水动力转染技术分别导入p MCU6-shRNA HBV、p U6-shRNA HBV及对照载体p U6-control。于转染后第1、7、14、21、28、35天,分别采用Real-time PCR及化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测转基因小鼠血清HBV DNA及HBs Ag水平,免疫组化染色观察转基因小鼠肝脏HBc Ag的表达。结果质粒注射后第721天,p U6-shRNA HBV及p MC-U6-shRNA HBV对转基因小鼠血清HBs Ag的表达及HBV DNA的复制均有明显抑制作用,与p U6-control相比差异有统计学意义(P<0.05);21d后p U6-shRNA HBV组血清HBs Ag及HBV DNA均有所回升,至第35天基本回复至对照水平;至注射后35d,p MC-U6-shRNA HBV依然保持较强的体内抑制作用,与其他两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,与p U6-shRNA HBV组相比,p MC-U6-shRNA HBV组小鼠肝组织内HBc Ag阳性细胞数明显减少。结论与p U6-shRNA HBV质粒相比,微环shRNA质粒p MC-U6-shRNA HBV对HBV转基因小鼠体内乙肝病毒的抑制作用持续时间更长久。采用微环DNA作为shRNA的体内递送载体与普通的质粒载体相比具有一定优势。

• 单位
  解放军第458医院