摘要

目的探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在矽肺小鼠模型中的表达,及其对人肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblast,HPF)增殖和分化的影响,并研究其机制。方法在小鼠体内建立矽肺模型,利用RT-q PCR和免疫组化法检测肺组织中PGRN的mRNA和蛋白表达;在体外,利用CCK-8实验检测PGRN对HPF细胞增殖的影响,利用RT-qPCR检测HPF细胞Ⅰ型胶原α1链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain,col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(collagen type Ⅲ alpha 1 chain,col3a1)、纤维连接蛋白(fibronectin,fn)的mRNA表达;western blot检测HPF细胞增殖相关信号通路ERK1/2-p-ERK1/2、分化相关蛋白纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达;细胞免疫荧光检测PGRN对HPF细胞FN蛋白表达的影响。结果在矽肺小鼠模型中,RT-qPCR结果显示在肺组织中PGRN的mRNA水平升高(t=6.646,P<0.001),蛋白水平升高(t=8.278,P<0.001)。与对照组比较,外源性PGRN作用48 h促进HPF细胞增殖(F=34.835,P<0.001),1.0μg/ml PGRN上调col1a1 mRNA表达1.10倍(t=4.867,P=0.040)、col3a1 mRNA表达1.14倍(t=6.733,P=0.021)、fn mRNA表达2.85倍(t=11.684,P=0.007);0.5μg/ml PGRN组的p-ERK1/2蛋白表达上调1.9倍(q=24.663,P<0.001),FN蛋白上调1.1倍(q=7.206,P<0.001);1.0μg/ml PGRN组的p-ERK1/2蛋白表达上调2.7倍(q=47.243,P<0.001),FN蛋白上调1.5倍(q=32.997,P<0.001),呈剂量依赖趋势。免疫荧光实验也证实PGRN促进HPF细胞FN蛋白表达升高。结论 PGRN在矽肺中高表达,并促进肺成纤维细胞增殖和分化,提示PGRN可能是参与矽肺纤维化进展的重要细胞因子。