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摘要
铁载体被认为是嗜水气单胞菌的毒力因子之一,其由amoCEBFAGH七个基因编码, AmoCGH在前人的研究中已证实参与铁载体的合成。RT-PCR实验表明amoAEF基因的表达受到铁的调控。为进一步探究amoAEF基因的功能,利用融合PCR和基因同源重组原理,以自杀性质粒PRE112为载体构建基因缺失株ΔamoA、ΔamoE和ΔamoF。通过CAS平板检测实验以及arnow实验来检测野生株WT与各基因缺失突变株铁载体的合成情况,并比较野生株与各缺失株在低铁培养基中的生长差异。结果显示,成功构建了基因缺失株ΔamoA、ΔamoE和ΔamoF;在富铁条件下,基因缺失株ΔamoA、ΔamoE和ΔamoF的生长与野生株无显著性差异,但在低铁条件下,基因缺失株ΔamoA、ΔamoE和ΔamoF的生长能力、铁载体合成能力显著低于野生株。可见, amoA、amoE和amoF基因是嗜水气单胞菌铁载体合成的关键基因,其缺失会导致细菌在低铁环境中的生长受到抑制。
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