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摘要
目的:研究NF-κB P65 si RNA对IL-17诱导下心肌细胞MCP-1表达的影响作用。方法:差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞进行原代培养。利用阳离子脂质体将NF-κB P65 si RNA瞬时转染入小鼠心肌细胞,荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测NF-κB P65 si RNA对IL-17诱导下MCP-1 m RNA和蛋白的含量变化。荧光定量RT-PCR和Western blot检测IL-17作用下P-P65和P65 m RNA和蛋白含量变化。结果:与转染阴性对照si RNA组相比,转染阴性对照si RNA+IL-17组MCP-1 m RNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。与转染阴性对照si RNA组相比,转染NF-κB P65 si RNA组MCP-1 m RNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与转染阴性对照si RNA+IL-17组相比,转染NF-κB P65 si RNA+IL-17组MCP-1 m RNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。NF-κB P65 si RNA转染24 h后,NF-κB P65在基因及蛋白水平表达均被明显抑制(P<0.05)。IL-17作用心肌细胞不同时间后,检测发现随时间增加P-P65蛋白含量逐渐增加,15 min到达高峰,随后逐渐下降,各作用时间与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而P65蛋白含量变化不大,各作用时间与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-17可以通过促进心肌细胞内NF-κB P65磷酸化上调MCP-1的表达,而NF-κB P65 si RNA能够通过沉默P65基因表达有效抑制IL-17对MCP-1的上调作用。
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