结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞转分化的调节机制

作者：张春; 朱忠华; 刘建社; 杨晓; 邓安国

来源：中华医学杂志, 2005, (41): 45-50.

DOI：10.3760/j:issn:0376-2491.2005.41.010

• 生长物质
• 肾小管
• 上皮细胞
• 肌动蛋白类
• 胶原

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的直接影响,并探讨阻断内源性CTGF表达对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞转分化的干预效果,以阐明CTGF在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HKC)。在观察CTGF对HKC的直接作用时,将HKC细胞分为三组:(1)对照组;(2)小剂量CTGF组:培养液中加入重组人CTGF(rhCTGF),终浓度为2·5μg/L;(3)大剂量CTGF组:rhCTGF终浓度为5·0μg/L。在探讨CTGF在TGF-β1诱导HKC转分化中的作用时,将细胞分为4组:(1)正常对照组;(2)TGF-β1刺激组(培养液加入重组人TGF-β1蛋白,浓度为10·0μg/L);(3)TGF-β1+CTGF正义寡核苷酸(ODN)组(先以CTGF正义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激);(4)TGF-β1+CTGF反义ODN组(先以CTGF反义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激)。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定HKCα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅳ型胶原(colⅣ)mRNA水平的变化;间接免疫荧光方法检测HKC胞浆内α-SMA的表达;流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率;ELISA方法测定培养液上清中colⅣ的浓度。结果不同浓度rhCTGF作用于HKC24h后,α-SMA mRNA水平显著升高(P<0·01),而colⅣmRNA表达水平明显下降(均P<0·01);刺激48h后,胞浆α-SMA表达明显增强,流式细胞仪测得三组细胞α-SMA阳性百分率依次为:2·4%、38·9%、65·5%(P<0·01);ELISA结果表明,rhCTGF抑制了colⅣ的分泌(P<0·01)。TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和α-SMA。转染后6h,CTGF反义ODN可显著抑制HKC表达CTGF和α-SMA mRNA(P<0·01)。转染后48h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内α-SMA蛋白合成。结论CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,而CTGF反义ODN的导入可有效抑制TGF-β1诱导的转分化过程。因此,CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院