H7和N9亚型及A型流感病毒多重荧光定量RT-RCR检测方法的建立

作者：徐晓龙; 包红梅; 马勇; 施建忠; 曾显营; 李雁冰; 王秀荣; 陈化兰

来源：中国预防兽医学报, 2014, 36(12): 939-942.

• A型流感病毒
• H7N9亚型流感病毒
• 多重TaqMan荧光定量RT-PCR

为同时检测H7亚型、N9亚型和A型流感病毒,本研究根据流感病毒H7 HA、N9 NA以及M基因序列分别合成3对引物和3种荧光素标记的探针,建立了多重Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,仅H7亚型和N9亚型病毒分别在FAM和JOE通道监测到荧光信号,而所有A型参考流感病毒株均可获得Cy5荧光信号,此外其他相关的禽源病毒检测结果均为阴性。同时,以H7N9亚型病毒RNA为模板建立了标准曲线,检测H7 HA、N9 NA以及M基因的R2值均为0.999,最低检出量均为35.4 EID50/m L。批内和批间试验的变异系数均小于1.48%。利用该方法对1 072份临床样品(咽喉和泄殖腔拭子)检测,H7N9亚型和A型流感病毒分别检出7份和23份。该方法可以有助于H7N9亚型和A型流感病毒的快速检测及鉴定。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 农业部