基于RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的甘草水提物生物限值测定研究

作者：张琼玲; 肖苏萍; 刘蕾; 张权; 丁世兰; 闫惠捷; 王继永; 游云^*

来源：中国药物警戒, 2020, 17(10): 659-664.

DOI：10.19803/j.1672-8629.2020.10.03

• 甘草水提物
• RAW264.7
• 吞噬
• 生物评价
• 巨噬细胞
• 限值测定

目的建立基于小鼠巨噬细胞系RAW264.7吞噬功能的甘草水提物生物限值测定方法,从生物活性层面对甘草进行质量控制。方法由中国中药有限公司提供4个批次的甘草水提物冻干粉,批号分别为:GCGSQ、GCGSC、GCNMG、GCXJ,GCGSC作为验证使用。首先对细胞实验条件进行优化,并从甘草水提物对巨噬细胞吞噬功能影响的量效关系、精密度、重复性等方面进行考察。采用CCK-8法考察细胞密度、LPS浓度、3个批次甘草水提物对巨噬细胞增殖活性的影响,确定合适的给药浓度范围;采用中性红吞噬实验考察3个批次药物对巨噬细胞吞噬功能的影响,确定药物作用限值及检测限。结果实验结果提示巨噬细胞优选接种密度为3×105个/m L、药物作用时间为24 h、LPS浓度为0.25μg/mL,当甘草水提物质量浓度为125～500μg/mL时对巨噬细胞增殖及吞噬功能的影响呈剂量依赖性,当浓度为125μg/mL时促增殖作用和促吞噬功能最强;通过对3个批次甘草水提物对巨噬细胞吞噬功能作用的精密度及重复性进行考察,确定当甘草水提物浓度为125μg/mL为限值剂量,其吞噬指数范围为115%～129%。结论本实验结合甘草免疫调节的药理活性,建立了基于RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的甘草水提物生物限值评价方法,在本研究确定的试验条件下,确定125μg/mL为限值剂量,在该限值浓度下巨噬细胞的吞噬指数在115%～129%范围内,可判断为质量合格。

• 单位
  中国中药有限公司; 中国中医科学院中药研究所