不同核心启动子对中国仓鼠卵巢细胞重组蛋白表达的影响

作者：肖梦珂; 华宇; 冯莹莹; 路江涛; 翟海晖; 王天云; 贾岩龙^*

来源：新乡医学院学报, 2021, 38(06): 501-504.

• 核心启动子
• 中国仓鼠卵巢细胞
• 重组蛋白
• 巨细胞病毒
• 超级核心启动子

目的探讨不同核心启动子对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞重组蛋白表达的影响。方法以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,分别构建以巨细胞病毒(CMV)启动子、Natural CMV启动子、超级核心启动子(SCP) 2和SCP3驱动的表达载体并转染CHO细胞,根据转染表达载体的不同将细胞分为对照组、Natural CMV组、SCP2组和SCP3组。应用荧光倒置显微镜观察报告基因EGFP的瞬时转染效率,流式细胞术检测各组第1代和第30代细胞中EGFP表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组第30代细胞中EGFP mRNA相对表达量。结果对照组、Natural CMV组、SCP2组细胞的瞬时转染效率比较差异无统计学意义(P> 0.05); SCP3组细胞的瞬时转染效率显著高于对照组(P <0.05)。对照组、Natural CMV组、SCP2组、SCP3组第1代多克隆细胞中EGFP表达水平两两比较差异均无统计学意义(P> 0.05),对照组、Natural CMV组、SCP2组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平两两比较差异无统计学意义(P> 0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平显著高于对照组、Natural CMV组和SCP2(P <0.05)。对照组与Natural CMV组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0.05),SCP2组、SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于对照组、Natural CMV组(P <0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于SCP2组(P <0.05)。结论 SCP3能够显著提高CHO细胞中重组蛋白的表达及稳定性。

• 单位
  基础医学院; 新乡医学院; 公共卫生学院