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摘要
苦碟子含有绿原酸等多种酚酸类化合物,该类化合物具有抗氧化和清除自由基等生物活性。对香豆酰转移酶(Hydroxycinnamoyltransferase,HCT)是此类化合物生物合成途径中的关键酶。本研究以苦碟子叶片为实验材料,采用转录组测序、序列分析以及RT-PCR的方法,获得一条对香豆酰转移酶基因,命名为IsHCT(GenBanK:MH151086)。序列分析表明该基因长1 320 bp,编码439个氨基酸。通过氨基酸序列比对及生物信息学分析发现,IsHCT氨基酸序列含有两个保守结构域,属于BAHD家族中的HCT酶类。系统发育进化树结果表明,该序列与菊苣的CiHCT的同源性最高,序列相似性高达95%。通过在大肠杆菌中过表达IsHCT和来源于拟南芥的对香豆酰辅酶A连接酶(At4CL),并在发酵培养基中饲喂底物咖啡酸和奎尼酸,在发酵液中检测到绿原酸的合成,表明IsHCT能够催化咖啡酰辅酶A与奎尼酸合成绿原酸,具有对香豆酰转移酶功能。
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