乙醇脱氢核酶ribox02与NAD+/NADH结合位点的探测

作者：李丹彬; 张静; 陈东戎^*

来源：复旦学报(医学版), 2018, 45(05): 664-670.

DOI：10.3969/j.issn.1672-8467.2018.05.010

• 乙醇脱氢核酶
• ribox02
• NAD+/NADH
• RNA二级结构
• SHAPE
• ITC
• UV交联耦合

目的探讨乙醇脱氢核酶ribox02与NAD+、NADH特异性结合的位点以及结合力性质。方法通过选择性2-OH酰基化学探测法(selective 2-hydroxyl acylation analyzed by primer extension,SHAPE)探测ribox02的二级结构;利用等温滴定量热法(isothermal titratio calorimetry,ITC)进一步测定ribox02与NADH、NAD+的亲和力强度及作用力性质;通过紫外交联法精确定位NAD+、NADH与ribox02 RNA的特异性结合位点。结果直接解析ribox02的二级结构,并发现核酶ribox02与NADH、NAD+的相互作用力为范德华力或氢键作用,且ribox02与NADH的相互作用力较之与NAD+更为强烈,ribox02与NADH、NAD+的特异性结合位点为23G、24U、25U、38U、72U、73U、74U、75G和95G。结论通过ribox02的二级结构及其与NAD+、NADH的相互作用揭示了核酶ribox02与NAD+/NADH特异性结合位点以及结合力性质。

• 单位
  复旦大学