膀胱平滑肌细胞条件培养液诱导脐带MSCs向平滑肌细胞分化的实验研究

作者：员海超; 柳良仁; 郑硕; 刘振华; 杨璐; 蒲春晓; 李金洪; 龙丹; 魏强; 韩平

来源：中国修复重建外科杂志, 2013, 27(12): 1506-1511.

• 脐带
• MSCs
• 膀胱平滑肌细胞条件培养液
• 平滑肌细胞
• 诱导分化

目的探讨膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)条件培养液能否诱导脐带MSCs(umbilical cord MSCs,UCMSCs)向平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)分化,为组织工程技术应用于泌尿系统修复重建寻找可供选择的种子细胞。方法取足月新生儿脐带和行膀胱全切术患者捐赠的正常膀胱组织,分别分离培养UCMSCs和BSMCs。收集第1~5代BSMCs的培养液,与完全培养基以1∶1比例配制成BSMCs条件培养液。取第3代UCMSCs作为诱导细胞,使用BSMCs条件培养液培养为诱导组(A组),完全培养基培养为对照组(B组),倒置显微镜观察两组细胞形态变化;另设单纯BSMCs为阳性对照组(C组)。培养7、14 d,采用免疫荧光染色和Western blot检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Calpon in、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)的表达情况。结果诱导培养后,A组细胞逐渐变长,由短棒状、多个突起逐渐转变为长梭形,与BSMCs形状相似;B组细胞形态未见明显变化。免疫荧光染色示,C组BSMCs中α-SMA、Calponin和SM-MHC均呈阳性表达。培养7 d,A、B组可见α-SMA呈阳性表达;14 d时,A组α-SMA阳性表达逐渐增多,B组无明显变化。培养7 d,A组可见Calponin阳性表达,14 d时阳性表达明显增多;B组各时间点均未见Calponin阳性表达。各时间点A、B组均未见SM-MHC阳性表达。Western blot检测示各组细胞α-SMA、Calponin和SM-MHC蛋白表达情况与免疫荧光染色结果基本一致。结论 BSMCs条件培养液能诱导UCMSCs向SMCs分化,UCMSCs有望成为泌尿系统修复重建可供选择的种子细胞之一。

• 单位
  四川大学华西医院